临床ELISA测定现通常为采用手工操纵的以微孔板条为固相的测定模式，测定操纵非常简朴，一般涉及到标本的收集保留、试剂预备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判定和结果讲演及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚。溅出会对临近孔产生污染。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响。ELISA试剂盒作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相长进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*结合，必需在一定的温度前提下反应一定的时间。

    应根据药代动力学选择服药后的zui适时间抽血检测。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。使用微量加样器加样必需留意的枢纽点是：ELISA试剂盒加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产气愤泡。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集，要留意收集时间甚或体位有可能会对。

    温育是ELISA试剂盒测定中影响测定成败zui为枢纽的一个因素。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要留意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很轻易泛起重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区泛起非特异吸附，从而引起非特异显色。