一款合适的ELISA试剂盒可以说是实验成功的保障,因为只有获得正确的ELISA试剂盒,下游的分析结果才可能准确。目前,市面上有多种多样的分离试剂盒可供选择,它们的主要区别在于分离方法和筛选标志。那么,如何选择自己的细胞分离试剂盒呢?希望本文能为你提供一些帮助。
正向选择VS负向选择
试剂盒分离试剂盒的工作原理主要有两种,正向选择和负向选择。正向选择的试剂盒直接结合的抗体来进行捕获。这种抗体通常与磁珠相连,可以利用磁铁将悬液中的抗体-磁珠-复合物提取出来,再通过二抗将磁珠与目标分开。负向选择的试剂盒也采用类似的抗体包被磁珠,不过这种试剂盒是通过去除样品中的非目的,来间接捕获目的。
这两种细胞分离试剂盒如何取舍,主要取决于目标细胞的表面是否具有特异性强的筛选标志。这样的筛选标志能够实现特异性的捕获,避免所获得的细胞被非目标细胞污染。如果你的目标细胞刚好具有这样的筛选标志,那么正向选择的ELISA试剂盒就是很好方法。但如果目标试剂盒并不具有特异性强的筛选标志,那我们还是选用负向选择的细胞分离试剂盒。
筛选标志的确定
通过PubMed等数据库中的文献,我们一般可以确定在目标上表达的筛选标志。如果文献中找不到适合自己的表面标志,我们还可以用目标的DNA序列进行BLAST搜索。BLAST搜索结果会显示,目标细胞上可能表达的表面标志,在此基础上可以选取用于捕获的细胞表面蛋白。举例来说,对一个T进行BLAST搜索,结果会显示该是否表达CD4或CD8。在得知目标表达CD4之后,我们可以先对样品进行一个免疫实验(如ELISA),以检验BLAST搜索的结果。一旦证实目标的确表达CD4,我们就可以用相应试剂盒来筛选CD4阳性的T细胞。