western blot的试验过程及注意事项的材料 
1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳搬运到硝酸纤维膜上。 
1）搬运缓冲液洗刷凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回翻滚去除一切的气泡。 
2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用搬运缓冲液浸湿），将凝胶夹在中心，坚持湿润和没有气泡。 
3）将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸依照厂家主张办法放入电泳装置中，凝胶面向阴极。 
4）将上述装置放入缓冲液槽中，并灌满搬运缓冲液以吞没凝胶。 
5）依照厂家所示接通电源开端电泳搬运。 
6）搬运完毕后，取出薄膜和凝胶，弃去凝胶。 
2. 将薄膜漂在氨基黑中快速染色，直至分子量规范闪现时取出，记载下规范方位。 
3. 用100ml水洗刷纤维素膜，必要时可用脱色缓冲液。 
4. 膜置印迹缓冲液中于37℃保温1小时。 
5. 室温下，用PBS-Tween缓冲液洗刷薄膜。 
6. 用封口机将薄膜封入塑料袋中，尽可能不留空气。 
7．袋的一角剪一缓冲液的小口，用透析袋夹紧。 
8．混合：NGS(100微升)，印迹缓冲液中的抗体（10毫升），加在装薄膜的袋中，于室温下摇摆2小时（或4℃过夜） 
9．用总体积300ml PBS-Tween缓冲液，分4次在一浅盘中洗刷薄膜，每次75ml。 
10． 将衔接生物素的羊抗兔IgG（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升 NGS）加在袋内，于室温下摇摆1小时。 
11． 按过程9洗刷。 
12． 参加抗生素蛋白-HRP（40微升溶于10毫升印迹缓冲液/100微升 NGS），于室温下摇摆。 
注意事项： 
western blot中搬运在膜上的蛋白处于变性状况，空间结构改动，因而那些辨认空间表位的抗体不能用于western blot检测。这种情况能够将表达意图蛋白的细胞或细胞裂解液中的一切蛋白物素化，再用酶符号亲和素进行western blot。试验中取胶和膜需带手套。