一抗的选择

一般说来，在运用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，关于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而防止二抗与样本内源性免疫球蛋白发生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不该选择小鼠或大鼠源的一抗，选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子的抗兔 IgG。

假设选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测办法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含 IgG 的细胞裂解物样本的 western blotting 检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培育上清中含有免疫球蛋白，复原变性样本中含IgG，在western blot 检测中则结合出现 IgG 分子50 and 25 kDa 的重链和轻链条带。

二抗的选择

二抗应选用与运用的一抗相同的物种来历，例如：假设你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗 anti-mouse secondary 。主张查看二抗说明书保证该抗体适用于你的检测运用， 二抗一般衔接荧光素 FITC 或发光团。

两层染色抗体的选择

两层染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培育物或组织切片的两层免疫染色要求一抗来历于不同物种而且二抗别离辨认其中之一，二抗说明书应描绘其与其它物种来历的免疫球蛋有否有交叉吸附。

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