技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 植物谷胱甘肽还原酶(GR)ELISA试剂盒说明书
植物谷胱甘肽还原酶(GR)ELISA试剂盒说明书
更新时间:2014-11-26   点击次数:1951次

ELISA试剂盒实验原理:

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物谷胱甘肽还原酶(GR)水平。用纯化的植物谷胱甘肽还原酶(GR)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物谷胱甘肽还原酶(GR),再与HRP标记的谷胱甘肽还原酶(GR)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽还原酶(GR)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物谷胱甘肽还原酶(GR)活性。

ELISA试剂盒操作步骤:

标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,活性分别为36 U/L,24 U/L,12 U/L,6 U/L ,3 U/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

上海晶抗生物工程有限公司

上海晶抗生物工程有限公司

地址:上海市金山工业区亭卫公路6558号9幢2441室

版权所有:上海晶抗生物工程有限公司  备案号:沪ICP备16026504号-5  总访问量:559512  站点地图  技术支持:智慧城市网  管理登陆

Baidu
map