ELISA试剂盒应用中效果的评价
更新时间:2016-07-18 点击次数:1417次
由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去除全部有机溶剂。即ELISA试剂盒前处理步骤中把样本在60℃氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。
浓缩方式:氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。
注意:
1在吹干样本之前,用甲醇清洗针头,防止杂质干扰。
2在吹样本时,针头应在液面上空,避免与样本接触,防止产生交叉污染。
3样本吹干后应立即取下,避免吹的时间过长,影响zui终检测结果。
4不同的药物,吹干后样本的保质期不同,提倡待样本回到室温后立即复溶。
5净化
经过提取的待测组分中通常含有一些会干扰试剂盒中抗原抗体反应的杂质或者是含有与待测物结构相似的杂质。将待测组分与杂质分离的过程,我们称为ELISA试剂盒中样本的净化。
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml4℃过一夜。次日,ELISA试剂盒弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,ELISA试剂盒洗涤。
4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。