LCM技能别离细胞速度较以往办法有很大进步,例如,从肾安排切片中别离一个肾小球(Glomerulus)所需时刻小于10秒,一小时内即可轻松地别离上百个肾小球。
神经体系首要由两类细胞构成:神经元和胶质细胞。
在脑内,不一样解剖区域行使不一样功用,这儿所讲的解剖区域是指核团。
美国国立健康研讨院肿瘤研讨所病理研讨室与生物医学设备组协作研发激光捕获显微切开技能,发展为Acturus 的PixCell II体系。
在操作这套体系时,首要在安排切片上掩盖一层通明的膜,在显微镜下查询该安排切片,挑选某一分外细胞后,打开脉冲式红外激光束,使膜融化变得粘性很强(该膜的成份为 Ethylene Vinyl Acetate Polymer),等到冷却后将该方位的细胞牢固地粘附在上面然后别离细胞。
该种办法较以往办法改善的当地:首要,它简略,不需求移动任何切片部位,一步即可完毕从安排中别离分外细胞,这些在膜上的细胞依然坚持其原有的形状,运用无菌、一次性的膜可zui大极限地防止或许的污染。
因此,假定研讨者首要是为了研讨很多种基因在特定核团的神经元或胶质细胞的表达状况,新的解决方案之一便是组合LCM技能、RNA扩增技能和基因芯片技能。
即运用LCM技能将特定核团的神经元或胶质细胞取出,获取总RNA或mRNA,RNA反转录为cDNA并进行扩增.zui终将cDNA标记为探针,和基因芯片杂交。
假定研讨的基因品种数不多,那么也能够只获取LCM取得的细胞的总RNA,运用定量RT-PCR技能来进行基因表达剖析。
这关于后续进行PCR查看是尤为重要的。其次,使膜活化所需的激光能量很小(<50mW),与惯例显微协作是满足的,完够满足临床病理安排细胞显微别离的需求。
核团在显微镜下才能够区别,是相对会合在一个区域的或许行使必定功用的神经元和胶质细胞的集合体。
把某个核团从脑内取出来是不太实践的。脑内核团数以百计,假定要想研讨基因在脑内核团的表达水平,在早年只能用原位杂交技能。
假定要想研讨蛋白质的表达水平或磷酸化等状况,只能用免疫安排化学技能。
而这两个技能虽然能准确定位基因或蛋白质在脑内核团的表达状况,缺点是通量小。