因为特异性ELISA试剂盒免疫反应随抗体活性和纯度的增加而增强。在酶标记过程中，抗体的活性有所降低，故需要纯度高、效价高及抗原亲和力强的抗体球蛋白，使用亲和层析提纯的抗体，可提高敏感性，而且可稀释使用，减少非特异性吸附。
常用琼脂扩散或免疫电泳法，使抗原与抗体形成沉淀线，经PBS漂洗1天，再以蒸馏水浸泡1小时，将琼脂凝胶片浸于酶底物溶液中着色，如果出现应有的颜色反应，再用生理盐水浸泡，颜色仍然不褪，表示结合物既有酶的活性，也有抗体活性。
良好的结合物在显色后，琼扩滴度应在1:16以上。另一个测定方法是用系列稀释的酶标抗体直接以ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)方法进行方阵滴定，此法不仅可以测定标记效果，还可以确定酶标抗体的使用浓度。,酶联免疫试剂盒)方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面，ELISA试剂盒(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。
