T4 RNA连接酶

T4 RNA连接酶

英文名称 ： T4 RNA Ligase

分子量 ： 43.6kDa，单体

级 别 ： BR

保 存 ： -20°C

来 源 ： 含有T4噬菌体克隆基因63的大肠杆菌

浓 度 ： 10u/ul

活性定义 ： 是指在37℃、30分钟内将1nmol 5'-[32P]-(A)12-18转化为磷酸酶抗性形式所需的酶量

酶活性分析混合物 ： 50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 10uM 5'-[32P]-(A)12-18(10uM 5'-末端）

保存液组分 ： 20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA，0.5mM ELUGENT变性剂和50%(v/v)甘油

10×反应缓冲液 ： 500mM HEPES-NaOH(PH8.0，25℃), 100mM MgCL2, 100mM DTT

抑制剂 ： 金属螯合剂、SH基团修饰试剂

失 活 ： 70℃加热10分钟

质量控制 ： 测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染

备 注 ： 反应体系中ATP的浓度取决于连接反应的类型，推荐的BSA反应浓度是0.1mg/ml

性 状 ： 重组酶，催化ATP依赖的分子内和分子间磷酸二酯键连接（5'-磷酸基团和3'-羟基末端），底物分子为多聚核苷酸、寡核苷酸、ssRNA和ssDNA，分子之间的小的连接底物是核苷3'，5'-二磷酸，而分子内连接的小底物是8个碱基的寡核苷酸。配套提供反应缓冲液、ATP和BSA溶液。催化3'→5'磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5'-磷酸末端和5'-羟基末端连接。作用底物包括单链RNA、DNA及二核苷焦磷酸。随酶提供10X 反应缓冲液

用 途 ： 生化研究。连接RNA和RNA ；RNA3'-末端标记胞嘧啶3'，5'-双[a-32P]磷酸； tRNA的特异性修饰；合成寡核苷酸的环化；寡聚脱氧核糖核苷酸与单链cDNA连接，用于5'RACE（快速扩增cDNA末端）分析